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PCR - ein leistungsstarkes Werkzeug für vielfältige Anwendungen



Microsynth bietet einen umfassenden Arbeitsablauf, der bereits bei der Probenextraktion beginnt, um qualitativ hochwertige Daten zu erzeugen. Wenn Sie sich dafür entscheiden, Ihre PCR-Anwendung auszulagern, sparen Sie nicht nur Zeit und Aufwand, sondern profitieren auch von der technischen Expertise und den Einrichtungen zur Durchführung verschiedener PCR-basierter Experimente.

 

Digitale PCR vs. Real-time PCR vs. Endpunkt-PCR auf einen Blick:

  Digital PCR Real-Time PCR End-Point PCR
Übersicht Die Überführung der Probe in tausende von Nanoliter-Endpunkt-PCR-Reaktionen ermöglicht die Bestimmung der absoluten Konzentration des Analyten. Misst die Anreicherung des PCR-Amplifikationsprodukts, während es entsteht.

Misst die Menge des akkumulierten PCR-Produkts am Ende der PCR-Zyklen.

Quantitativ? Ja, die Kompartimentierung des Analyten passt zu einer Poisson-Verteilung. Ja, die Daten werden während der exponentiellen Wachstumsphase (log) der PCR erfasst, wenn die Menge des PCR-Produkts direkt proportional zur Ausgangsmenge des Analyten ist. Nein, aber eine grobe Abschätzung der Menge des akkumulierten PCR-Produkts liefert "semi-quantitative" Ergebnisse.
Anwendungen
  • Absolute Quantifizierung der Viruslast
  • Absolute Quantifizierung von DNA oder RNA
  • Nachweis seltener Allele (Mutation oder SNPs in Flüssigbiopsien)
  • Absolute Quantifizierung der Genexpression
  • Genom-Edit-Detektion
  • Kopienzahlvariation (z. B. Qualitätskontrolle von CAR-T und anderen adoptiven Zelltherapien)
  • Umweltüberwachung
  • Quantifizierung von DNA-Resten
  • Quantifizierung der Genexpression
  • Microarray-Verifizierung
  • Qualitätskontrolle und Assay-Validierung
  • Pathogen-Nachweis
  • MicroRNA-Analyse
  • Virale Quantifizierung
  • siRNA/RNAi-Experimente

Amplifikation von DNA für:

  • Sequenzierung
  • Genotypisierung
  • Klonierung
Zusammenfassung

Die digitale PCR ist die Methode der Wahl, wenn:

  • Referenzen oder Standards kaum verfügbar sind
  • Sie eine robuste Quantifizierung benötigen (hohe Toleranz gegenüber PCR-Inhibitoren)
  • Sie seltene Targets in komplexen Hintergründen quantifizieren wollen
  • Sie kleine Fold-Änderungen detektieren wollen, wo die Real-Time PCR versagt

Real-time PCR ist die Methode der Wahl, wenn:

  • Sie den Analyten in einem sehr breiten dynamischen Bereich bis zu 9 Logs messen
  • Sie Konzentrationsänderungen des Analyten über das 2-fache erwarten
  • Sie ein kostengünstiges Hochdurchsatz-Screening durchführen wollen

Die Endpunkt-PCR ist die Methode der Wahl, wenn:

  • Sie eine genaue größenbasierte Unterscheidung benötigen
  • Sie einen spezifischen Locus der DNA/RNA für eine genauere Analyse amplifizieren
  • Sie das Vorhandensein des spezifischen Locus in Ihrer DNA/RNA bestätigen möchten